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產(chǎn)品與服務

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分子量測定

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產(chǎn)品描述
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常見問題

> 技術簡介

        鑒定蛋白質(zhì)的大小和純度最簡單的辦法莫過于通過SDS-PAGE,但是SDS-PAGE只能測定蛋白質(zhì)表觀分子量,對于蛋白質(zhì)精確分子量的測定,只能通過MALDI-TOF質(zhì)譜法。該方法將蛋白質(zhì)分子離子化后通過質(zhì)量分析器對其質(zhì)荷比進行分析,或進一步通過算法得到樣品的精確分子量。

> 技術原理

        MALDI-TOF/TOF主要由兩部分組成:基質(zhì)輔助激光解吸電離離子源(MALDI)和飛行時間質(zhì)量分析器(TOF)。MALDI技術是將樣品均勻包埋在基質(zhì)中,基質(zhì)吸收激光提供的能量而蒸發(fā),攜帶部分樣品分子進入氣相,并將一部分能量傳遞給樣品分子使其離子化。TOF的原理是離子在電場作用下加速通過飛行管道,根據(jù)到達檢測器的飛行時間不同先后被檢測,即測定離子的質(zhì)荷比(m/z)與離子的飛行時間成正比。

 

 

> 技術優(yōu)勢

  可用于大規(guī)模數(shù)量樣本檢測;

  不受樣本分子量大小的限制;

  高靈敏度、高準確性

> 應用領域

  蛋白分子量測定

> 技術路線

> 實驗儀器

  5800 MALDI TOF/TOF™(AB SCIEX)

> 數(shù)據(jù)分析

  蛋白分子量測定結(jié)果

 

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> 研究案例

葡萄糖醛酸木聚糖酶同工酶的定性研究

K. Hayashi, et al. Lett Appl Microbiol. 1996, 22(4):293-8.

> 研究背景

  木聚糖不僅是細胞壁的重要結(jié)構(gòu),而且是商業(yè)化和生物質(zhì)轉(zhuǎn)化中的目標聚合物。在玉米細胞壁中,由葡萄糖醛酸木聚糖酶釋放的木聚糖超過70%。早期研究顯示,葡萄糖醛酸木聚糖酶可能存在三種形式。本文基于葡萄糖醛酸木聚糖酶純化,對該酶及其同工酶進行N端測序、分子量和等電點(PI)測定以及比較GX1和GX2兩種亞型的動力學參數(shù)和理化性質(zhì)。

> 研究結(jié)果

  測序結(jié)果顯示GX1亞型木聚糖酶的序列為ASDVTVNVSAEKQVIRGFGGMNHPA WVGDL TAAQR ETAFG NGQNQLGFTI,而GX2亞型的前37位序列與GX1一致。此外,研究者將蛋白酶SDS-PAGE分離后進行MALDI-TOF分子量測定,其中GX1的分子量為44360+100,GX2的分子量為44370+100。毛細管電泳結(jié)果顯示,GX1的PI為9.0,GX2的PI為9.1。

 

  理化性質(zhì)比較結(jié)果顯示,兩種亞型在40 ℃,PH6.5條件下活性穩(wěn)定,當溫度超過55 ℃則酶活性下降。而兩種酶的最適PH范圍有所差別,其中GX1在PH7-8.5條件下活性穩(wěn)定,GX2在PH5-7條件下穩(wěn)定。

 

 

樣本類型

送樣量

純化后的蛋白溶液或干粉

純度> 90%,蛋白量>50 μg,濃度>1 μg/μL
揮發(fā)性無機鹽<20 mM,不揮發(fā)性無機鹽<5 mM

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